Sécurité et immunogénicité de la vaccination MVAA du nouveau-né et de la calmette-guérine sélective et retardée chez le nourrisson de mères infectées par le virus de l’immunodéficience humaine: un essai contrôlé randomisé en phase

ContexteVaccination des nourrissons infectés par le VIH avec bacille Calmette-Guérin BCG est contre-indiqué Les nouveau-nés exposés au VIH ont besoin d’une nouvelle stratégie de vaccination antituberculeuse qui protège contre la tuberculose tôt dans la vie et évite le risque potentiel de BCG jusqu’à l’exclusion de l’infection par le VIH. essai randomisé contrôlé randomisé sur le nouveau-né MVAA × PFU vs Candin®, suivi d’un vaccin BCG sélectif et différé à l’âge de 4 semaines pour les nourrissons non infectés par le VIH et de mois de suivi pour l’innocuité et l’immunogénicitéRésultatsUn total de nourrissons exposés au VIH Cependant, aucune différence significative n’a été observée dans le taux d’événements indésirables sévères ou graves, l’acquisition du VIH n = par bras, ou la tuberculose incidente n = MVAA; n = contrôle comparé au bras témoin La vaccination par MVAA induisait des cellules T CD interféron gamma IFNγ CD modestes mais significativement plus AgA-spécifiques par rapport au témoin à des semaines et P & lt; La réponse des lymphocytes T IFNγ CD spécifiques à l’AgA induite par le BCG à des semaines et était d’une ampleur similaire dans le bras témoin par rapport au bras MVAA à tous les points de temps Capacité proliferative, profils fonctionnels, et La primovaccination par MVAA des nouveau-nés exposés au VIH était sans danger et induisait une réponse immunitaire précoce, spécifique à l’antigène, qui n’interférait ni ne renforçait l’immunogénicité de la vaccination subséquente par le BCG. Nouvelle sous-unité protéique et les candidats vaccins contre la tuberculose à vecteur viral devraient être testés chez les nouveau-nés exposés au VIHClinical Trials RegistrationNCT

BACILLE Calmette-Guérin La vaccination BCG des nourrissons reste un outil essentiel pour protéger les jeunes enfants contre la tuberculose Compte tenu du risque élevé de progression de l’infection par Mycobacterium tuberculosis chez les jeunes enfants, et des formes disséminées de tuberculose, La vaccination des nourrissons par le BCG offre une protection partielle contre la tuberculose pulmonaire, miliaire et méningitique chez les enfants Dans les milieux où la charge de tuberculose est élevée, tous les enfants sont vaccinés contre la tuberculose. Les mères infectées par le VIH présentent un risque accru de tuberculose, y compris celles qui restent séropositives au VIH Un vaccin antituberculeux sûr et efficace pour les nourrissons exposés au VIH périnatale est nécessaire de toute urgence, car la vaccination par le BCG des nourrissons infecté est contre-indiqué en raison du risque de contamination locale, régionale, Le BCG et le syndrome inflammatoire de reconstitution du BCG après traitement antirétroviral Le traitement par antirétroviraux Cependant, un retard dans la vaccination par le BCG pour exclure l’acquisition périnatale du VIH pourrait exposer les nourrissons à la tuberculose dans les premières semaines de leur vie. Ces risques et avantages concurrents ont abouti à une approche pragmatique de la vaccination continue par le BCG des nouveau-nés exposés au VIH dont le statut VIH n’est pas encore connu dans des contextes où les taux de tuberculose infantile et d’infection à VIH maternelle sont élevés. Par exemple, environ un cinquième des femmes sud-africaines en âge de procréer étaient infectées par le VIH Malgré des réductions récentes de la transmission périnatale du VIH , le taux d’infection par le VIH est considérablement plus élevé que le nombre de semaines. pratiques d’alimentation mixte Il y avait un nombre estimé d’enfants sud-africains vivant avec le VIH en ; % des décès parmi les enfants âgés de & lt; Cette réaction ne résout pas le dilemme du BCG en matière de sécurité, car le BCG de routine est habituellement administré à la naissance. En outre, les nourrissons exposés au VIH en Afrique subsaharienne Étant donné le risque élevé de tuberculose et d’événements indésirables associés au BCG chez les nourrissons infectés par le VIH, nous avons émis l’hypothèse que retarder la vaccination de routine des nouveau-nés par le BCG jusqu’à ce que l’infection par le VIH ait été exclu, mais précédé d’un nouveau vaccin antituberculeux administré à la naissance, serait plus sûr et plus immunogène que la vaccination BCG seule retardée chez les nourrissons exposés au VIH Nous avons précédemment montré que la vaccination BCG tardive des nourrissons sud-africains non exposés au VIH induit réponse des cellules T polyfonctionnelles, avec des fréquences plus élevées et une meilleure qualité des cellules T CD spécifiques au BCG à l’âge de l’année par rapport au BCG nouveau-né v Des études contradictoires n’ont montré aucun bénéfice immunologique significatif du BCG retardé Cependant, une exposition in utero à une infection maternelle par le VIH et M tuberculose ne semble pas modifier les réponses immunitaires à long terme des nourrissons non infectés par le VIH à la vaccination par le BCG alopécie. semaines d’âge Les nouveaux vaccins antituberculeux candidats au développement clinique comprennent les vaccins mycobactériens recombinants et vivants atténués et les vaccins à vecteur viral ou à sous-unité protéique Un vaccin sans antécédents de sécurité chez les nourrissons et les personnes infectées par le VIH Pour tester cette nouvelle stratégie Bien que le MVAA ne confère pas de protection supplémentaire après le BCG chez les nourrissons non infectés par le VIH , la MVAA est un vaccin candidat idéal pour tester cette stratégie expérimentale puisque la MVAA est sûre dans cette population à haut risque. Ici, nous rapportons sur la sécurité et l’immunogénicité de la vaccination MVAA chez les nouveau-nés de mères infectées par le VIH, suivie de B sélective différée La vaccination par CG pendant des semaines pour les nourrissons non infectés par le VIH, dans un essai contrôlé, randomisé, en double aveugle

Méthodes

L’étude a été menée sur des sites près du Cap, Afrique du Sud. Les mères ont fourni un consentement écrit prénatal et postnatal pour la participation du nourrisson. Le protocole a été approuvé par les comités d’éthique des universités du Cap, Stellenbosch M // et Oxford. Les sujets ont été randomisés pour recevoir le vaccin MVAA × PFU ou Candin® dans les heures qui ont suivi la naissance en aveugle Figure A Le BCG a été administré – × cfu aux semaines d’âge uniquement aux nourrissons non infectés par le VIH à des semaines d’âge. [Test diagnostique de l’ADN du VIH avant l’âge semaines n’était pas de routine au moment Tous les nourrissons ont été suivis pour les critères de sécurité à semaines,,, et après MVAA / contrôle de vaccination et par la suite à semaines, et correspondant à des semaines, et après un retard de vaccination par le BCG aux semaines d’âge et à la semaine. Tous les nourrissons ont été soumis à un contrôle de sécurité EI locaux, régionaux et systémiques non sollicités Pour les analyses d’immunogénicité, le sang a été prélevé au bout de plusieurs semaines, et

Figure Vue largeDownload slideDessins d’études A et diagramme CONSORT B ​​Abréviations: BCG, bacille Calmette-Guérin; CONSORT, Normes consolidées d’évaluation des rapports; VIH, virus de l’immunodéficience humaine; PCR, amplification en chaîne par polymérase; TB, tuberculoseFigure View largeTélécharger Diapositives Diagramme d’études A et diagramme CONSORT B ​​Abréviations: BCG, bacille Calmette-Guérin; CONSORT, Normes consolidées d’évaluation des rapports; VIH, virus de l’immunodéficience humaine; PCR, amplification en chaîne par polymérase; Les nourrissons qui ont signalé un nouveau contact tuberculeux familial ou développé des symptômes ou des signes de tuberculose ont été étudiés pour la tuberculose comme décrit précédemment VIH non-infecté. Tuberculose, tuberculoseQuantiFERON-TB Gold QFT, Qiagen a été réalisée sur les mères à l’inscription des nouveau-nés et sur les nourrissons. les nourrissons atteints d’un contact tuberculeux familial ou d’un test cutané positif QFT ou tuberculinique ont été orientés vers un traitement préventif à l’isoniazide après exclusion de la tuberculose active Tous les nourrissons ayant reçu un diagnostic de tuberculose ont commencé un traitement antituberculeux selon les directives nationales

Essais fonctionnels de sang total

Le sang veineux a été recueilli dans des tubes contenant de l’héparine sodique pour des tests fonctionnels de courte durée et de longue durée afin de mesurer les réponses spécifiques des antigènes et la capacité proliférative, respectivement. Le sang total a été laissé en contrôle négatif non stimulé ou stimulé par le pool de , et le contrôle positif de la phytohémagglutinine Des essais ont été effectués comme décrit précédemment voir des échantillons de matériaux supplémentaires ont été colorés avec des panels optimisés d’anticorps monoclonaux Supplementary Materials, Table S et analysés en utilisant la cytométrie en flux.

Analyses statistiques

Dans la population ITT en intention de traiter pour l’analyse de sécurité, le nombre d’EI a été comparé entre les bras de l’étude pour les périodes précédant et suivant la vaccination BCG et pour toute la période d’observation. , par catégorie d’intérêt Des tests de proportions par catégorie ont été utilisés pour comparer le nombre d’EI entre les bras pour chaque type d’EI et les catégories. La correction de Bonferroni a été appliquée pour tenir compte des tests multiples. Des modèles linéaires à effets mixtes ont été utilisés pour évaluer l’impact Dans les cas où les hypothèses distributionnelles du modèle n’étaient pas respectées, des tests non paramétriques ont été utilisés pour évaluer les différences entre les bras à chaque moment et les changements dans le temps entre les bras. bras Wilcoxon test de la somme des rangs et des changements au fil du temps dans les bras Test de rang signé WilcoxonLa population ITT pour l’analyse de la sécurité comprenait tous La population ITT mITT modifiée pour l’analyse immunologique incluait tous les nourrissons qui avaient reçu le vaccin MVAA ou le vaccin témoin et le vaccin BCG et qui n’étaient pas infectés par le VIH, y compris les données de tous les moments d’échantillonnage disponibles.

RÉSULTATS

Participants

Après le dépistage des nourrissons, ont été randomisés et inclus dans l’analyse de sécurité ITT; les nourrissons ont été analysés selon le protocole. Figure B L’immunogénicité du MVAA et du BCG a été évaluée chez les nourrissons de la population mITT ayant reçu un MVAA n = ou témoin n = à la naissance et BCG à l’âge n = L’âge médian des mères; % des mères recevaient un TAR à long terme avec des cellules médianes de cellules CD / mm; et% de mères testées QFT positive L’âge gestationnel médian des nourrissons était de plusieurs semaines; % étaient des hommes; le poids médian de naissance était le kg; et% ont été allaités comme choix d’alimentation initial Les données démographiques de référence par bras d’étude sont présentées dans le tableau

Tableau Données démographiques de base Caractéristique MVAA n = Candin® Control n = poids médian à la naissance, g IQR – – âge gestationnel médian, semaines IQR – – sexe féminin, n% allaité, n% âge maternel médian, années IQR – – mère recevant un traitement antirétroviral, n% CDM maternel médian, cellules / mm IQR – – QuantiFERON maternel – tuberculose Or n% Caractéristique MVAA n = Candin® Témoin n = Poids médian à la naissance, g IQR – – Age médian gestationnel, semaines IQR – – Sexe féminin, n% Allaité, n% d’âge maternel médian, années IQR – – Mère recevant un traitement antirétroviral, n% CD maternel médian, cellules / mm IQR – – QuantiFERON maternel – tuberculose Or n% Abréviation: IQR, gamme interquartileVoir Grand

sécurité

Tous les EI sont présentés dans le tableau Au moins AE a été expérimenté par les nourrissons, y compris les nourrissons avec AEs site d’injection La majorité des nourrissons ont connu des EI légers ou modérés Vingt-cinq nourrissons ont connu au moins AE sévère, sans différence de taux entre MVAA et contrôle n = bras Aucun EI menaçant le pronostic vital n’a été observé Cinquante-huit nourrissons ont présenté au moins une EI SA grave; n = MVAA; n = témoin, y compris les décès n = MVAA; n = témoin, dont aucun n’a été classé comme étant lié au diagnostic de SAE. Les diagnostics de SAE reflétaient le tableau des maladies respiratoires et gastro-entérites typiquement observées dans les communautés étudiées

Tableau Tous les événements indésirables dans la population en intention de traiter tout au long de la période de suivi Total, n% MVAA, n% Candin® contrôle, n% P Valeur Participants avec ≥ événement indésirable Catégorie Site d’injection Lymphadénopathie Système systémique Système cardiovasculaire Appareil digestif endocrinien Hématologique / lymphatique Métabolique / nutritionnel Appareil locomoteur Neurologique Peau respiratoire Sollicitude urogénitale Léger Modéré Vigilance grave Vaccin potentiellement mortel MVAA / témoin Non reliée Improbable Possible Probable Vaccin définitif Relation bacille Calmette-Guérin Non reliée Peu probable Possible Probable Défini Résultat Mort En cours Récupéré avec séquelles Récupéré sans séquelle Inconnu Sérieux Sérieux Non sérieux Variable Total, n% MVAA, n% Candin® Contrôle, n% P Valeur Participants avec ≥ événement indésirable Catégorie Site d’injection Lymphadénopathie Système systémique Système de corps Cardiovasculaire Digestif Endocrinien Hématologique / lymphatique Métabolisme / nutrition Musculo-squelettique Neurologique Peau respiratoire Sollicitude urogénitale Légère Modérée Relation sévère avec le pronostic vital MVAA / contrôle Non reliée Improbable Possible Probable Definite Vaccin relation bacille Calmette-Guérin Non reliée Improbable Possible Probable Résultat définitif Décès En cours Récupérée avec séquelles Récupérée sans séquelle Inconnue Grave Sérieuse Non sérieuse Numérateur: les participants ayant au moins un événement indésirable; dénominateur est participants à study / armView Large

Au cours de la semaine suivant l’injection MVAA / contrôle chez le nouveau-né et avant la vaccination par le BCG, les nourrissons du groupe MVAA étaient plus susceptibles de présenter un AE n = que ceux du groupe témoin n =; Tableau Les réactions au site d’injection au cours de cette période étaient plus fréquentes chez les receveurs de MVAA que chez les témoins n = MVAA vs n = témoin; P & lt; ; il y avait plus d’EI parmi les receveurs de MVAA qui étaient d’intensité légère n = MVAA vs n = témoin; P & lt; Il n’y avait pas de différence dans le taux d’EI, y compris les EI au site d’injection, après la vaccination par le BCG entre les bras de l’étude. Matériel supplémentaire, Tableau S

Effets indésirables du tableau de la population en intention de traiter survenant au cours de la période après injection de MVAA / Candin® et avant Variable de vaccination bacille Calmette-Guérin Total, n% MVAA, n% Contrôle Candin®, | n% P Valeur Participants avec ≥ événement indésirable Catégorie Site d’injection & lt; Lymphadénopathie Système systémique Système cardiovasculaire Système digestif Endocrinien Hématologique / lymphatique Métabolique / nutritionnel Appareil locomoteur Neurologique Respiratoire Peau & lt; Gravité urogénitale légère & lt; Modérée Grave Relation potentiellement mortelle MVAA / contrôle Non reliée Improbable Possible Probable Résultat définitif Récupéré sans séquelles Récupéré avec séquelles Persistant Mort inconnu Grave Sérieux Non sérieux Variable Total, n% MVAA, n% Candin® Control, | n% P Valeur Participants avec ≥ événement indésirable Catégorie Site d’injection & lt; Lymphadénopathie Système systémique Système cardiovasculaire Système digestif Endocrinien Hématologique / lymphatique Métabolique / nutritionnel Appareil locomoteur Neurologique Respiratoire Peau & lt; Gravité urogénitale légère & lt; Modérée Relation sérieuse menaçant le pronostic vital MVAA / contrôle Non reliée Improbable Probable Probable Résultat définitif Récupéré sans séquelles Récupéré avec séquelles Persistant Mort Inconnu Sérieux Sérieux Non sérieux Le numérateur est un participant ayant au moins un événement indésirable; dénominateur est participants à study / armView Large

Acquisition du VIH et du M tuberculosis, diagnostic de la tuberculose

Un nourrisson & lt;%; le bras de contrôle a été diagnostiqué positif au PCR PCR à l’âge de quelques semaines et, selon le protocole, n’a pas été vacciné par le BCG à la première semaine du nourrisson allaité%; Le bras MVAA était séronégatif pour le VIH à l’âge de quelques semaines et a reçu le vaccin BCG mais a ensuite été testé positif au PCR à l’âge de cinq enfants testés positifs pour le QFT à l’âge n = bras MVAA; n = groupe témoin Huit nourrissons ont présenté une tuberculose au cours de la période de suivi de l’année n = MVAA; n = contrôle, dont M tuberculosis était positif pour la culture et a été diagnostiqué pour des raisons cliniques / radiographiques et des antécédents de contact avec la tuberculose Deux des cas de tuberculose étaient positifs au test QFT

AgA et réponses au lymphocyte T spécifiques du BCG

Pour évaluer l’immunogénicité de MVAA et BCG, nous avons mesuré les fréquences des cellules T productrices de cytokines exprimant des combinaisons d’interféron gamma [IFNγ], facteur de nécrose tumorale alpha [TNFɑ], interleukine [IL], IL, et / ou IL et leur différenciation basée sur la coexpression de CDRA et de CCR après une stimulation du sang total par AgA ou BCG, respectivement, MVAA a induit des fréquences plus élevées de cellules T CD IFNγ spécifiques à l’AgA et des semaines après la vaccination par rapport aux cellules T CD spécifiques induites par le BCG induite par le BCG. les receveurs du placebo étaient d’une ampleur similaire à ceux induits par la MVAA. La vaccination par le BCG n’a pas stimulé les cellules T CD spécifiques à l’AgA induites par le MVAA Figure B

Figure ViewDownloader des réponses de cytokine CD spécifiques àAgAgA On a stimulé du sang total frais avec des peptides AgA pendant des heures avant la coloration intracellulaire des cytokines et l’analyse de cytométrie en flux A, Comparaison transversale des fréquences de cellules T CD spécifiques à AgA exprimant l’interféron gamma IFNy chez les participants qui Bacille Calmette-Guérin a été administré à tous les participants à l’âge de semaines B, Les changements longitudinaux des cellules T CD spécifiques à l’AgA exprimant l’IFNγ sont indiqués par les flèches rouges pour le bras MVAA et noires pour les bras médians et Les fréquences des cellules T CD spécifiques exprimant différentes combinaisons d’IFNγ, de facteur de nécrose tumorale alpha et d’interleukine ont été comparées entre les boîtes solides des bras MVAA et les boîtes témoins des bras témoins aux semaines bleu, violet, vert. , et orange La boîte et les moustaches indiquent la plage médiane, interquartile et les valeurs P non ajustées minimales / maximales. cultivé par des modèles à effets mixtes dans A et B et par test de Mann-Whitney dans C Abréviations: BCG, bacille Calmette-Guérin; IFNy, interféron gamma; IL, interleukine; Réponses des cytokines CD spécifiques à l’antigène On a stimulé du sang total frais avec des peptides AgA pendant des heures avant la coloration intracellulaire des cytokines et l’analyse par cytométrie en flux A, Comparaison transversale des fréquences des cellules T CD spécifiques à AgA exprimant l’interféron. Bacille Calmette-Guérin a été administré à tous les participants à l’âge de semaines B, Les changements longitudinaux des cellules T CD spécifiques à l’AgA exprimant l’IFNγ sont indiqués par des flèches rouges pour le bras MVAA et le noir. C Les fréquences des cellules T CD spécifiques à l’AgA exprimant différentes combinaisons d’IFNγ, de facteur de nécrose tumorale alpha et d’interleukine ont été comparées entre les boîtes solides des bras MVAA et les boîtes claires des bras témoins à des semaines. bleu, violet, vert et orange La boîte et les moustaches indiquent la médiane, la gamme interquartile et le minimum / ma Les valeurs P non ajustées ont été calculées par des modèles à effets mixtes dans A et B et par test de Mann-Whitney dans C Abréviations: BCG, bacille Calmette-Guérin; IFNy, interféron gamma; IL, interleukine; TNFα, facteur de nécrose tumorale alphaMVAA induit principalement des cellules T CD exprimant l’IFNγ, dont beaucoup coexpriment IL et TNFɑ Figure C Il n’y avait pas de production détectable d’IL ou IL par les cellules T CD AgA avant que les données de vaccination BCG ne soient montrées. Figure A Les profils de coexpression des cytokines des lymphocytes T CD spécifiques du BCG étaient différents au cours des phases effectrices de la semaine et de la mémoire de la réponse et n’étaient pas affectés par l’amorce du MVAA Figure B À la semaine la plupart des lymphocytes T CD spécifiques du BCG étaient monofonctionnels Figure B, tranche bleue, et le sous-ensemble prédominant de ces cellules exprimait IL seul Figure B, arc violet

Figure Vue largeBacille Calmette-Guérin Réponses cytokines CD spécifiques au BCG Du sang frais frais a été stimulé par le BCG pendant des heures avant la coloration intracellulaire des cytokines et l’analyse de cytométrie en flux A, changements longitudinaux des lymphocytes T CDG spécifiques au BCG exprimant une combinaison d’interféron gamma IFNγ, le facteur de nécrose tumorale alpha TNFα, interleukine IL, IL et / ou IL sont indiqués par des flèches rouges pour le bras MVAA et noir pour les bras témoins et des intervalles de confiance en% IC; Les valeurs P non ajustées ont été calculées par les modèles à effets mixtes B, les modèles de coexpression des cytokines des réponses CD spécifiques au BCG à la semaine à gauche et à la semaine à droite dans le bras MVAA et les bras témoins par test de permutation. des cellules exprimant n’importe quelle cytokine; les coupes montrent la proportion relative des cellules coexprimant les cytokines bleues, vertes, jaunes ou orangées, identifiées par les arcs externes: IFNγ rouge, IL noir, IL orange, IL violet et TNFα vert foncé C, les profils de différenciation ont été définis en fonction des profils d’expression de CDRA et de CCR comme suit: TNL naïf, CDR CCR, mémoire centrale TCM, CDRA-CCR, effecteur TE, CDRA-CCR-, et effecteur terminal TTE, CDRA CCR- Représentation représentative de la cytométrie en flux des cytokines spécifiques au BCG CD T Cellules T CDD noires D, Changements longitudinaux des lymphocytes T cytokine CD spécifiques au BCG exprimant TNL maroon, TCM bleu, TE orange, ou phénotype vert TTE chez MVAA gauche ou contrôle des destinataires droits Médians et% CI pour les médianes Le nombre de participants répondant aux critères de coupure pour cette analyse, voir les méthodes est indiqué pour chaque visite. Les fréquences de tous les sous-ensembles ont augmenté de manière significative P & lt; après la semaine de vaccination par le BCG par rapport à la semaine et une diminution de P & lt; entre semaine et, à l’exception de TCM dans le bras MVAA, les valeurs P non ajustées ont été calculées par le test de paires appariées de Wilcoxon; semaine et n’ont pas été comparés en raison du faible nombre d’échantillons appariés inférieur à. Aucune différence significative n’a été observée lors de la comparaison des fréquences de chaque sous-groupe à chaque visite entre les bras de l’étude. Abréviations: BCG, bacille Calmette-Guérin; IFNy, interféron gamma; IL, interleukine; Réponses des cytokines CD spécifiques au BCG Du sang frais frais a été stimulé par le BCG pendant des heures avant la coloration des cytokines intracellulaires et l’analyse par cytométrie en flux A, Changements longitudinaux des lymphocytes T CD spécifiques du BCG exprimant n’importe quelle combinaison de l’interféron gamma IFNγ, du facteur de nécrose tumorale alpha TNFα, de l’interleukine IL, de l’IL et / ou de l’IL sont indiqués par des flèches rouges pour le bras MVAA et noir pour les bras témoins et des intervalles de confiance en%; Les valeurs P non ajustées ont été calculées par les modèles à effets mixtes B, les modèles de coexpression des cytokines des réponses CD spécifiques au BCG à la semaine à gauche et à la semaine à droite dans le bras MVAA et les bras témoins par test de permutation. des cellules exprimant n’importe quelle cytokine; les coupes montrent la proportion relative des cellules coexprimant les cytokines bleues, vertes, jaunes ou orangées, identifiées par les arcs externes: IFNγ rouge, IL noir, IL orange, IL violet et TNFα vert foncé C, les profils de différenciation ont été définis en fonction des profils d’expression de CDRA et de CCR comme suit: TNL naïf, CDR CCR, mémoire centrale TCM, CDRA-CCR, effecteur TE, CDRA-CCR-, et effecteur terminal TTE, CDRA CCR- Représentation représentative de la cytométrie en flux des cytokines spécifiques au BCG CD T Cellules T CDD noires D, Changements longitudinaux des lymphocytes T cytokine CD spécifiques au BCG exprimant TNL maroon, TCM bleu, TE orange, ou phénotype vert TTE chez MVAA gauche ou contrôle des destinataires droits Médians et% CI pour les médianes Le nombre de participants répondant aux critères de coupure pour cette analyse, voir les méthodes est indiqué pour chaque visite. Les fréquences de tous les sous-ensembles ont augmenté de manière significative P & lt; après la semaine de vaccination par le BCG par rapport à la semaine et une diminution de P & lt; entre semaine et, à l’exception de TCM dans le bras MVAA, les valeurs P non ajustées ont été calculées par le test de paires appariées de Wilcoxon; semaine et n’ont pas été comparés en raison du faible nombre d’échantillons appariés inférieur à. Aucune différence significative n’a été observée lors de la comparaison des fréquences de chaque sous-groupe à chaque visite entre les bras de l’étude. Abréviations: BCG, bacille Calmette-Guérin; IFNy, interféron gamma; IL, interleukine; TNFα, facteur de nécrose tumorale alphaWe a également mesuré le phénotype mémoire des lymphocytes T CD spécifiques du BCG exprimant la cytokine Figure C Fréquences de lymphocytes T CDN de type naïf, de mémoire centrale TCM, de TE effecteur et de cellules T CDT effectrices terminales entre les bras d’étude à n’importe quelle visite, bien que l’administration de BCG ait induit tous les sous-ensembles de façon significative par semaine vs; P & lt; pour tous les sous-ensembles dans les deux bras de l’étude, les lymphocytes T à mémoire centrale ont été maintenus à des niveaux similaires entre la semaine et la semaine seulement dans le bras MVAA, tandis que tous les autres sous-ensembles ont diminué P & lt;

Les lymphocytes T CD spécifiques d’AgA et de BCG ont été détectés à de faibles taux, principalement exprimés IFNγ ou TNFα, et ne présentaient pas de différence entre les groupes de matières d’étude, les figures SA, SB et les données non montrées

Réponses prolifératives T-Cell à AgA et BCG

La prolifération des lymphocytes T est une mesure sensible de l’immunogénicité du vaccin Les réponses prolifératives spécifiques au BCG ne sont généralement pas affectées de façon persistante par l’exposition au VIH ou l’administration retardée de BCG évaluée en mesurant l’expression de la capacité proliférative du marqueur associé au cycle cellulaire Ki des cellules T spécifiques de l’antigène et leur régulation cytotoxique positive des médiateurs cytotoxiques granzyme A, granzyme B, granzyme K, granulysine et perforine au jour la stimulation du sang total avec AgA ou BCG, respectivement MVAA et BCG ont induit des réponses prolifératives de faible CD similaires à Ag, qui ont été perdues par année d’âge Figure A L’administration de BCG n’a pas encore amplifié les réponses prolifératives amorcées par MVAA

Figure Vue étendueDownload Prolongation des cellules T en réponse à AgA et bacille Calmette-Guérin BCG Du sang total frais a été stimulé avec des peptides AgA ou BCG pendant plusieurs jours avant coloration intracellulaire des marqueurs Ki et cytotoxiques et analyse cytométrique en flux Fréquences de AgA spécifique A et BCG Les lymphocytes T CD spécifiques exprimant le marqueur de prolifération Ki ont été analysés longitudinalement dans les lignes rouges MVAA et les flèches et contrôlent les lignes noires et les bras flèches Les médians et les intervalles de confiance en% pour les médianes sont calculés par des modèles d’effets mixtes C, médiateur cytotoxique Comparaison des profils de coexpression des réponses CD spécifiques BCG à travers les semaines d’étude en bras MVAA et bras témoin par test de permutation Aucune différence significative entre les bras étude n’a été observée à chaque visite. Les Ties représentent les lymphocytes T CD spécifiques totaux BCG exprimant Ki, et les tranches représentent la proportion relative de cellules co-exprimant des marqueurs cytotoxiques identifiés par les arcs externes: gr Anzyme Un bleu, granzyme B rouge, granulysin vert, granzyme K orange et perforin violet Les tranches noires indiquent la proportion de cellules proliférantes n’exprimant aucun marqueur cytotoxique. Le nombre de participants répondant aux critères de coupure pour cette analyse voir les méthodes est indiqué dans chaque tarte Abréviation: BCG, bacille de Calmette-GuérinFigure ProlongationTélécharger slideCD Prolifération des cellules T en réponse à AgA et bacille Calmette-Guérin BCG Du sang total frais a été stimulé par des peptides AgA ou BCG pendant plusieurs jours avant coloration intracellulaire des marqueurs Ki et cytotoxiques et analyse cytométrique en flux. des cellules B CD spécifiques à AgA et BCG exprimant le marqueur de prolifération Ki ont été analysées longitudinalement dans les lignes rouges MVAA et les flèches et contrôlent les lignes noires et les bras des flèches. Les médianes et les intervalles de confiance pour les médianes sont indiqués. modèles d’effets mixtes C, modèles de coexpression de médiateurs cytotoxiques de réponses CD spécifiques BCG ont été com Pas de différences significatives entre les bras de l’étude ont été observées à toute visite Les tartes représentent les cellules T CD spécifiques totaux BCG exprimant Ki, et les tranches représentent la proportion relative des cellules coexprimant les marqueurs cytotoxiques identifiés par les arcs externes: granzyme A bleu, granzyme B rouge, granulysin vert, granzyme K orange, et perforin violet Les tranches noires dénotent la proportion de cellules proliférantes n’exprimant aucun marqueur cytotoxique Le nombre de participants répondant aux critères de coupure pour cette analyse voir les méthodes La vaccination par bacille de Calmette-GuérinBCG a induit une forte réponse proliférative à BCG au BCG, qui ne différait pas selon le bras de l’étude et n’était pas maintenue au-dessus des niveaux de prévaccination par année d’âge. Figure B: Phase effectrice des réponses induites par le BCG semaine, la majorité des lymphocytes T proliférantes CD expression positive des médiateurs cytotoxiques Figure C, La proportion de cellules T CD proliférantes exprimant des médiateurs cytotoxiques avait diminué par semaine, mais comprenait encore environ un tiers des cellules T CD spécifiques du BCG. Figure C Aucune différence dans le potentiel cytotoxique observé entre les bras de l’étude à tout moment Figure C

DISCUSSION

des améliorations systémiques dans la prévention périnatale de la prévention de la transmission mère-enfant [PTME] et parce que le TAR maternel ou la prophylaxie périnatale était nécessaire pour l’inscription des nourrissons. Cette stratégie de vaccination antituberculeuse aurait donc un impact encore plus important sur le BCG. L’innocuité des vaccins dans les pays où les programmes de PTME sont plus faibles et périnataux sont plus élevés. Il est également frappant de constater que le taux de conversion des QFT chez les nourrissons exposés au VIH était inférieur à celui des nourrissons non exposés au VIH dans ces communautés. Alors que l’incidence globale de tuberculose% était similaire à ce qui a été décrit dans les rapports précédents , les diagnostics cliniques ont probablement entraîné une surestimation du taux réel de la maladie. risque pour la transmission de la tuberculose et la maladie chez les nourrissons à l’étude, comme en témoigne le rat maternel QFT positif e%, qui est considérablement inférieur à celui observé chez les jeunes adultes non infectés par le VIH dans la même communauté Nous et d’autres avons montré que retarder l’administration du BCG de la naissance à l’âge – semaines ne nuit pas à l’immunogénicité BCG à long terme. Nous avons évalué les effets de l’administration d’un vaccin antituberculeux nouveau-né sur l’immunogénicité de la vaccination différée BCG MVAA était faiblement immunogène, induisant principalement des cellules spécifiques IFNγ AgA avant administration BCG Chez les nourrissons vaccinés BCG, une plus grande abondance de cellules libérant IFNγ après stimulation BCG a été associée. Les faibles réponses des cellules T IFNγ induites par MVAA pourraient être suffisantes pour protéger contre la tuberculose avant l’administration du BCG. Nos résultats diffèrent de ceux des observations précédentes chez les nourrissons exposés au VIH et non exposés au VIH. dans lequel MVAHIVA était peu immunogène, en raison peut-être de différences dans la conception de l’étude, la dose plus faible de MVAHIVA, l’âge à Cependant, ces essais n’ont montré aucune interférence par l’administration MVA avec l’immunogénicité des vaccins infantiles de routine, soutenant davantage le développement clinique de cette stratégie. Remarquablement, le BCG n’a pas encore stimulé les réponses des lymphocytes T spécifiques à l’AgA MVAA. Ces résultats diffèrent des observations faites en utilisant la stratégie de vaccination inverse, dans laquelle MVAA augmentait significativement les réponses des lymphocytes T CD spécifiques à AgA amorcées par le BCG Ces observations suggèrent que MVAA est plus immunogène lorsqu’il est utilisé comme vaccin boost après l’amorçage BCG ou alternativement, que BCG ne peut pas amplifier davantage les réponses de cellules T spécifiques de AgA qui ont été maximisées par MVAA Indépendamment, la vaccination par le BCG a induit des amplitudes similaires de réponses de lymphocytes T spécifiques AgA dans les groupes témoins et MVAA Nous déduisons que pour un antigène donné, Le MVA est un vecteur aussi efficace que le BCG, mais la réponse immunitaire à AgA chez cette population de nouveau-nés est faible. VAA prime n’a pas interféré avec l’immunogénicité BCG en ce qui concerne l’ampleur, la qualité fonctionnelle, le phénotype mémoire, et la capacité proliférative des cellules T CD spécifiques à l’antigèneT-prolifération cellulaire a été mesurée pour évaluer les fonctions immunitaires pertinentes autres que la production de cytokines, telles que Contrairement à la production de cytokines, les réponses prolifératives des cellules T à AgA et BCG n’étaient pas maintenues à l’âge de l’année De même, nous avons précédemment rapporté que la libération d’IFNγ mesurée sur une journée de stimulation du sang total avec BCG était principalement indétectable par âge, indépendamment de l’âge à l’administration BCG naissance vs semaines et exposition au VIH Bien que les raisons sous-jacentes de la perte de potentiel prolifératif restent à déterminer, il est important de mesurer les fonctions des lymphocytes T autres que la production d’IFNγ. Évaluer l’immunogénicité de nouvelles stratégies de vaccination L’interprétation de nos résultats est limitée par l’absence d’infection par le VIH. En outre, la taille de l’échantillon de l’étude a été sélectionnée pour évaluer la sécurité et l’immunogénicité et n’a pas été utilisée pour tester l’efficacité contre l’infection à M tuberculosis ou la tuberculose. Enfin, bien que MVAA ait un excellent bilan de sécurité idéal pour une étude expérimentale en médecine, d’autres études sont nécessaires pour tester ce principe pour des candidats vaccinaux potentiellement plus efficaces En conclusion, le profil acceptable de sécurité et de réactogénicité, une immunogénicité modeste et un manque d’interférence l’immunogénicité du BCG permet de tester d’autres vaccins primaires nouveaux-nés, y compris d’autres candidats à base de vecteur et de protéine-adjuvant avec des antigènes supplémentaires pour renforcer l’immunogénicité. Cette nouvelle stratégie devrait être poursuivie afin de fournir une immunité protectrice contre M tuberculosis dans les premiers mois de vie. , tout en étant sûr pour toutes les expositions au VIH bébés nés

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Remarques

Remerciements Nous remercions les participants à l’étude, leurs familles et les communautés du district de Cape Winelands East et de Khayelitsha; le personnel de l’Initiative antituberculeuse sud-africaine et du Centre TB Desmond Tutu; Prakash Jeena, Brian Eley, Lewellys Barker et Margaret Snowden Soutien financier Ce travail a été soutenu par le Conseil de recherche médicale du Royaume-Uni, le Département pour le développement international, et la subvention du programme conjoint des essais de santé mondiaux du Wellcome Trust. G / et par AERAS H Mc S est chercheur principal en recherche clinique Wellcome Conflits d’intérêts potentiels Les auteurs déclarent qu’il n’y a pas de conflit d’intérêts Tous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits d’intérêts potentiels que les rédacteurs jugent pertinents. manuscrit ont été divulgués