Pneumonie liée au coronavirus E chez les patients immunodéprimés

Les souches de coronavirus E et OC ont été associées à diverses maladies respiratoires allant du rhume simple autodesol à la pneumonie sévère. Bien que les maladies sous-jacentes chroniques soient des déterminants majeurs des infections virales respiratoires sévères, peu de données sur la pneumonie coronavirus chez les patients immunodéprimés sont disponibles. rapportent des cas bien documentés de pneumonie liée au coronavirus E, chacun avec une présentation clinique différente Le diagnostic a été fait sur la base de résultats de culture virale et de microscopie électronique présentant des particules typiques de la couronne et par amplification du génome viral par la transcriptase inverse. réaction en chaîne Sur la base de ce rapport, les coronavirus doivent être considérés comme des micro-organismes responsables de la pneumonie chez les patients immunodéprimés

Les complications pulmonaires sont fréquentes chez les patients immunocompromis traités pour hémopathies malignes, et ils couvrent un large éventail d’étiologies, y compris les infections d’origine bactérienne, fongique, parasitaire ou virale; œdème pulmonaire; hémorragie alvéolaire diffuse; la toxicité induite par le médicament ou le rayonnement; maladie du greffon contre l’hôte; et bronchiolite oblitérante En outre, une entité appelée «syndrome de pneumonie idiopathique», définie comme une lésion pulmonaire diffuse dont l’étiologie n’est pas identifiée, est fréquemment reconnue après une greffe de cellules souches hématopoïétiques. Un grand nombre de ces cas de pneumonie peuvent être liés Les coronavirus sont des virus à ARN monocaténaire à sens positif, dont les particules sont de forme irrégulière. L’enveloppe extérieure porte des péplomères en forme de massue Apparence de la couronne Deux souches de coronavirus, OC et E, sont connues pour être impliquées dans des maladies humaines, principalement dans le syndrome du rhume, mais aussi dans la pneumonie. Les coronavirus sont récemment devenus un sujet d’intérêt particulier. en tant que principal agent associé à l’épidémie mondiale de syndrome respiratoire aigu sévère SRAS We rapportent des cas bien documentés de pneumonie liée au coronavirus chez des patients immunodéprimés traités pour des malignités hématologiques Notre stratégie diagnostique combinait la culture virale de cellules HUH et la RT-PCR contrôlée par hybridation avec des sondes spécifiques à la souche

Patients et méthodes

Étude de cas Un homme âgé de 1 an a été admis à l’hôpital avec de la fièvre, une perte de poids et une toux non productive continue. Trois ans auparavant, ce patient était traité pour un lymphome non hodgkinien de stade II, selon le protocole français LNH [ En raison de la progression de la maladie, il a subi une intensification de chimiothérapie à haute dose soutenue par HSCT autologue. Une rémission complète a été obtenue. Des rechutes sont survenues des années après la greffe et ont été traitées avec une forte dose de récupération séquentielle combinant étoposide, ifosfamide, mitoxantrone et cytarabine. Après le deuxième cycle de chimiothérapie, des vésicules cutanées disséminées sont apparues, suggérant des éruptions associées au virus varicelle-zona. Aucun symptôme respiratoire ou radiographie thoracique anormale. Le patient a été traité avec succès par acyclovir par voie intraveineuse mg / kg toutes les heures après l’achèvement du traitement par acyclovir. , le patient a développé une toux fébrile non productive sans dys Une radiographie thoracique a montré un syndrome interstitiel bilatéral, ce qui a été confirmé par un scanner qui a montré des opacités micronodulaires disséminées. Les valeurs artérielles du gaz sanguin respirant dans l’air ambiant étaient normales Autres résultats de laboratoire: numération leucocytaire, cellules / mm, polynucléaire les cellules et les lymphocytes; La numération plaquettaire, les plaquettes / mm Les taux d’enzymes hépatiques étaient normaux Les échantillons d’expectoration étaient négatifs pour les espèces de Legionella lorsqu’elles étaient soumises à une immunofluorescence directe et la culture bactérienne des échantillons d’expectoration ne présentait aucune croissance Les résultats des tests d’échantillons sériques pour l’antigène Aspergillus galactomannan étaient également négatifs de l’antibiothérapie empirique pipéracilline et ciprofloxacine, lavage broncho-alvéolaire fibre optique BAL a été réalisée dans le lobe moyen L’analyse cytologique des échantillons du liquide BAL a montré des cellules nucléées / mm, avec% de cellules polymorphonucléaires,% macrophages, et% lymphocytes identifiés comme cellules T lymphocytes par analyse de cytométrie de flux [% de cellules CD et% de cellules CD] Les résultats des examens microbiologiques directs et des cultures sont restés négatifs pour les bactéries; mycobactéries; les champignons; et les parasites, tels que Pneumocystis carinii Les résultats des dosages immunofluorescents pour les virus respiratoires multiples virus respiratoire syncitial [VRS]; les virus parainfluenza I, II et III; adénovirus; virus de l’herpès simplex [HSV], VZV, et immunoperoxydase coloration pour cytomégalovirus CMV étaient négatifs dans les échantillons de liquide BAL Le résultat d’un test de PCR réalisé sur des échantillons de liquide BAL avec des amorces VZV-spécifiques En revanche, un effet cytopathogène a été observé dans la lignée cellulaire HUH d’hépatome humain cultivée avec des échantillons de liquide BAL, non reconnue par les virus grippaux et parainfluenza. , RSV, adénovirus, rougeole, entérovirus ou anticorps spécifiques au VZV Les résultats de la microscopie électronique ont identifié des particules de type corona dans le surnageant de culture. Un test de RT-PCR a été réalisé avec des cellules HUH infectées et non infectées. Le gène des coronavirus humains a confirmé le diagnostic et a typé le virus en tant que souche E, mais pas en tant que souche OC. Les produits de RT-PCR ont également été caractérisés s séquences de virus E par hybridation avec une sonde spécifique dans un immunodosage enzymatique de l’ADN La présence d’ARN coronavirus dans les échantillons liquides de BAL a été confirmée par amplification des séquences E, tandis que les résultats de RT-PCR ont été réalisés avec des oligonucléotides la séquence du gène de la souche OC reste négative

Figure Vue largeDispositif de microscopie électronique du milieu de culture provenant de l’échantillon de liquide de lavage broncho-alvéolaire prélevé sur le patient Remarquez la présence de particules de coronavirus avec des pointes minces en forme de massue flèches colorées avec une solution tamponnée à l’acide phosphotungstique, pH Line is μm in longFigure micrographie du milieu de culture provenant de l’échantillon de liquide de lavage broncho-alvéolaire prélevé sur le patient Noter la présence de particules de coronavirus avec de fines pointes en forme de massue flèches colorées avec% de solution tamponnée à l’acide phosphotungstique, pH Line est de μm

NE, Surnageant de la culture cellulaire HUH d’un autre patient avec Lane froid commun, surnageant des cellules HUH non infectées Lane, Lane d’extraction contrôle négatif, contrôle négatif PCR mix Lane, Souche contrôle positif E cultivé dans les cellules MRC Lane, marqueurs taille L pbFigure View largeTélécharger Coulée de bromure d’ethidium d’un gel d’agarose%, montrant des produits d’amplification RT-PCR du gène M du coronavirus avec des amorces spécifiques de la souche E, surnageant de la culture cellulaire HUH pour le patient Lane, surnageant de la culture cellulaire HUH d’un autre patient. , Négatif contrôle Lane Lane, Négatif contrôle PCR mélange Lane, Souche témoin positif E cultivé dans les cellules MRC Lane, marqueurs de taille L pbLes résultats des tests de séroneutralisation à effet cytopathique ont montré une faible réponse anticorps initial, mais une différence significative entre la réponse en anticorps des échantillons de sérum de pré-infection, & lt; Toutes les études sérologiques pour les virus respiratoires adénovirus, myxovirus, paramyxovirus et RSV, CMV, VZV, virus d’Epstein-Barr, HSV et espèces de Mycoplasma n’ont révélé aucune augmentation significative du titre d’anticorps sérique, et les résultats Le résultat a été spontanément favorable, et la fièvre a disparu en quelques jours sans modification du régime antibiotique, ce qui était en accord avec une amélioration des résultats des radiographies thoraciques. Étude de cas Une patiente âgée de plus d’un an a été admise Elle a été traitée avec la chimiothérapie Mechlorethamine, vincristine, procarbazine et prednisone MOPP des années auparavant pour le lymphome hodgkinien avec des adénopathies cervicales et médiastinales. Une première rechute avec atteinte pulmonaire et gastrique. a été traité avec salut En raison d’une deuxième rechute avec atteinte pulmonaire et gastrique, le patient a subi une greffe de moelle osseuse allogénique avec un régime de conditionnement associant cyclophosphamide à forte dose et fludarabine. Le patient a été traité avec de l’amphotéricine B mg / kg par jour Quatre jours après la transplantation, une insuffisance respiratoire rapidement progressive s’est développée, entraînant une hospitalisation à l’admission à l’ICUAt. , l’examen physique a révélé une détresse respiratoire aiguë avec des respirations tachypnée / min, des crépitements bilatéraux et une saturation en oxygène du% en respirant avec un masque à oxygène à forte concentration, et un rythme cardiaque de choc, battements / min; pression sanguine, / mm Hg avec marbrure disséminée Les gaz du sang artériel obtenus en respirant de l’oxygène avec un masque à oxygène à forte concentration à un débit de L / min sont les suivants: pH,; pression partielle de dioxyde de carbone, kPa; pression partielle d’oxygène, kPa; bicarbonates, mmol / L Les résultats de laboratoire ont révélé pancytopénie nombre de globules blancs, cellules / mm; hémoglobine, g / dL; numération plaquettaire, plaquettes / mm, insuffisance rénale aiguë niveau de créatinine, μmol / L, et protéine C-réactive du syndrome inflammatoire, mg / L; fibrinogène, g / LA radiographie thoracique révélant des opacités alvéolaires et interstitielles disséminéesL’état du patient se détériore rapidement, nécessitant une intubation endotrachéale et une ventilation mécanique Les résultats d’un test effectué sur un échantillon de sécrétion trachéobronchique étaient positifs pour A fumigatus, conduisant à un traitement associant voriconazole et caspofungine Après une amélioration initiale des caractéristiques cliniques et radiologiques et de la récupération de la moelle osseuse, l’état respiratoire du patient s’est aggravé et des opacités alvéolaires bilatérales sont apparues sur une radiographie thoracique. Les résultats des analyses sanguines des antigènes Aspergillus galactomannan et CMV pp sont restés négatifs. dans la région linguale étaient hémorragiques, et les résultats d’un examen cytologique quantitatif ont été non contributifs, en raison de nombreuses cellules lysées Les résultats de recherches approfondies pour détecter la présence de micro-organismes bactéries, mycobactéries, champignons, parasites, Le CMV et le RSV étaient négatifs Malgré des soins de soutien agressifs avec ventilation mécanique, réanimation liquidienne et perfusion de norépinéphrine à haute dose, l’hypoxie réfractaire a rapidement entraîné une défaillance multiviscérale fatale. Aucune autopsie n’a été réalisée. Les cultures de spécimens de liquide de BAL sont restées négatives pour les bactéries, mycobactéries et champignons Les mêmes procédures de culture virale et de RT-PCR ont été appliquées que dans l’étude de cas décrite ci-dessus. Les résultats des tests d’inoculation effectués avec les cellules HUH étaient également positifs, révélant des particules corona-like identifiées par la suite comme coronavirus E par RT-PCR. le surnageant de culture et les échantillons de liquide de BAL

Discussion

Dans les deux cas, des faits importants ont conduit au diagnostic de pneumonie associée au coronavirus E: premièrement, l’exclusion des étiologies infectieuses alternatives et, deuxièmement, l’identification du coronavirus E dans les échantillons de liquide de BAL par une combinaison de culture, microscopie électronique et RT. -PCR Dans le cas du premier patient, le diagnostic différentiel principal était la pneumonie associée au VZV, complication la plus fréquente de la varicelle chez l’adulte et habituellement concomitante aux vésicules cutanées. Cependant, les symptômes respiratoires ne sont apparus qu’après l’achèvement du traitement antiviral. d’une éruption cutanée, et à la fois la culture virale et PCR pour VZV effectuées sur des échantillons liquides de BAL ont été séroconversion rétrospectivement confirmée le diagnosticLe deuxième patient a présenté une insuffisance respiratoire aiguë sévère qui a conduit à une défaillance multiorganique fatale, malgré une durée de vie maximale. complication fréquente chez les patients recevant une ventilation mécanique, et elle est associée à un taux de mortalité élevé, en particulier chez les receveurs de moelle osseuse. L’étiologie bactérienne prédomine largement dans la pneumonie sous ventilation assistée, mais le CMV a été identifié comme une cause possible chez les patients adultes et des poussées de coronavirus et d’adénovirus chez les enfants. ICU ont été décrites Dans le cas que nous décrivons, bien que les résultats négatifs des cultures bactériologiques ne puissent exclure une origine bactérienne, une identification secondaire du coronavirus dans les échantillons de liquide de la BAL fournit une forte probabilité qu’un diagnostic d’origine virale soit exact. existent, mais ils manquent de sensibilité ou de spécificité lorsqu’ils sont utilisés pour le dépistage systématique des échantillons respiratoires. Ces méthodes comprennent l’identification de particules ressemblant à des corona, des immunofluorescences avec des anticorps monoclonaux et l’hybridation d’ARN dans des échantillons liquides provenant du lavage nasal ou du LBA. basé sur les résultats d’ELISA, peut être utile, mais il ne permet pas une identification virale rapide et ne fournit qu’un diagnostic rétrospectif Nous avons identifié un coronavirus chez les deux patients car les spécimens de BAL ont été cultivés dans la lignée humaine HUH d’hépatome, qui exprime un récepteur spécifique pour les coronavirus En effet, une sensibilité et une spécificité améliorées ont été obtenues avec des méthodes de détection moléculaire combinant RT-PCR avec des amorces spécifiques de la souche dérivées du gène de la protéine M, suivies par une hybridation moléculaire avec des spécificités. À l’inverse, la sensibilité élevée des méthodes d’amplification peut conduire à des résultats faussement positifs causés par la contamination des échantillons de liquide de la BAL par des virus pharyngés. La combinaison de la culture virale et de la RT-PCR des échantillons de liquide de BAL apparaît donc être une stratégie de diagnostic efficace et fiable Les souches aviaires, E et OC, ont déjà été associées à des maladies humaines avec divers syndromes cliniques, allant du rhume simple autodesol à la pneumonie Récemment, l’épidémie mondiale de SRAS était liée à un nouveau coronavirus qui n’avait pas été identifié auparavant chez les êtres humains ou les animaux Les manifestations cliniques du SRAS combinent symptômes grippaux, toux sèche et essoufflement, associés à des infiltrats pulmonaires visibles par radiographie thoracique. Contrairement aux symptômes bénins courants des infections à coronavirus chez les personnes en bonne santé, un grand La proportion de patients atteints du SRAS souffre d’une insuffisance respiratoire sévère nécessitant un soutien ventilatoire aux soins intensifs L’impact d’un virus respiratoire sur les individus est largement déterminé par leurs conditions sous-jacentes et en particulier par leur immunosuppression La prévalence des infections pulmonaires à coronavirus chez les immunodéprimés patients est inconnu, et il est probablement largement sous-estimé dans les abs Cependant, les résultats de RT-PCR ont été négatifs pour les coronavirus dans les échantillons de BAL des receveurs de HSCT avec des infiltrats pulmonaires aigus Ainsi, seul cas de coronavirus La pneumonie associée a été précédemment décrite chez un patient immunodéprimé après une greffe de moelle osseuse autologue, le diagnostic étant basé sur la présence de particules virales dans les échantillons de liquide de BAL . L’identification du coronavirus chez les patients immunodéprimés à haut risque peut entraîner l’adoption précoce d’un stratégie thérapeutique, mais en l’absence de preuve de l’efficacité des médicaments antiviraux, le traitement reste symptomatique Dans ces circonstances, différents types d’IFN présentant des propriétés antivirales contre les coronavirus peuvent être évalués