Fréquences préformées des cellules T et B spécifiques au cytomégalovirus CMV Identifier les personnes sensibilisées au CMV protégées parmi les receveurs de greffe rénale séronégative

Contexte L’infection à cytomégalovirus CMV reste une complication majeure après transplantation rénale Le risque CMV initial est typiquement déterminé par la présence sérologique d’anticorps anti-IgG spécifiques du CMV, même si les réponses des lymphocytes T aux principaux antigènes viraux sont cruciales lors du contrôle de la réplication virale. Les patients séronégatifs qui reçoivent une allogreffe IgG séropositive ne développent pas d’infection à CMV malgré l’absence de prophylaxie Nous avons émis l’hypothèse qu’une évaluation plus précise de la sensibilisation immunitaire spécifique au CMV prétransplantation en utilisant les tests immuno-enzymatiques B et T peut identifier une sensibilisation au CMV. Méthodes Nous avons comparé la présence de lymphocytes B et de lymphocytes T préformés spécifiques du CMV chez des receveurs de transplantation rénale chez des patients sR séropositifs au sérum anti-CMV IgG-sR- et anti-séropositifs au CMV IgG obtenir plus d’informations. dans les deux groupesRésultats Tous les patients sR s une large gamme de réponses spécifiques aux cellules T et B de la mémoire CMV Des fréquences élevées des lymphocytes T et B ont également été détectées en% des patients sR-, et ceux ayant des fréquences élevées de lymphocytes T spécifiques au CMV ont significativement incidence plus faible de l’infection à CMV tardive après traitement prophylactique L’analyse de la courbe caractéristique du récepteur pour la prédiction de la virémie CMV et de la maladie a montré une zone élevée sous la courbe caractéristique de fonctionnement du récepteur, qui s’est traduite par une sensibilité élevée et une valeur prédictive négative. les réponses spécifiques des lymphocytes T et des cellules B devant la mémoire avant la transplantation rénale chez les receveurs sR peuvent aider à identifier plus précisément les individus immunisés, étant finalement à un risque plus faible d’infection par le CMV

transplantation rénale, infection à CMV, test ELISPOT T et B, immunité adaptative Malgré les progrès remarquables réalisés avec l’avènement des stratégies antivirales préventives, l’infection à cytomégalovirus CMV reste l’infection opportuniste la plus fréquente chez les transplantés rénaux Bien que l’infection primaire chez les hôtes immunocompétents soit généralement asymptomatiques, les receveurs de greffe courent un risque accru de développer une infection à CMV dans la période suivant immédiatement la transplantation. Ceci constitue un défi critique pour la survie du greffon et du patient La réponse immunitaire au CMV est considérée comme primordiale dans le contrôle viral. infection Cependant, la réponse immunitaire adaptative humorale, évaluée par les titres d’immunoglobulines IgG sérologiques spécifiques du CMV, est le seul marqueur actuellement disponible pour la stratification du risque immunitaire en pratique clinique. Malheureusement, cette approche ne permet pas d’identifier complètement receveurs de greffe sensibilisés à risque réduit d’infection par le CMV après la transplantation En effet, il existe des preuves cliniques claires pour cette position; Bien que la plupart des receveurs séropositifs séropositifs recevant une allogreffe séropositive ne développent probablement pas d’infection à CMV après la transplantation, jusqu’à% -% peuvent présenter une maladie à CMV sans prophylaxie antivirale En outre, même si la plupart des patients séronégatifs développent un CMV Une importante proportion de% -% ne connaîtra jamais l’infection par le CMV Un important ensemble de preuves suggère que la surveillance des réponses des lymphocytes T spécifiques du CMV, à différents moments avant et après la transplantation, peut permettre une caractérisation du profil de risque immunitaire contre l’infection par le CMV La mesure des anticorps IgG circulants spécifiques du CMV est la méthode la plus courante pour évaluer l’état de sensibilisation des lymphocytes B spécifiques au CMV Cependant, cette approche peut sous-estimer l’ampleur réelle de la réponse immunitaire humorale, car il exclut l’ensemble de la mémoire B-pool de cellules En fait, les cellules B mémoire peuvent exister i n l’absence de taux d’anticorps sériques décelables , mais sont capables de se différencier rapidement en ASCs sécrétant des anticorps, ce qui peut être très pertinent pour une réponse humorale efficace. Par conséquent, une évaluation directe des cellules T et B mémoire CMV chez les receveurs de greffe pourrait fournir une image plus complète de leur réponse immunitaire adaptative mémoire contre CMVThis étude visait à enquêter sur les compartiments de lymphocytes T et B de mémoire CMV-base spécifiques en utilisant des dosages ELISPOT immunospot hautement liés enzyme-liés dans une cohorte de séronégatifs et séropositifs Nous avons mesuré la fréquence des lymphocytes T et B de l’IFN interféron-IFN spécifiques à l’interféron et déterminé si le statut de sensibilisation immunitaire vis-à-vis du CMV pourrait être plus précis que celui des titres d’IgG circulantes du CMV. La stratification du risque CMV, et ils fournissent de nouvelles perspectives dans les mécanismes de la réponse immunitaire adaptative nse contre l’infection à CMV dans la transplantation rénale

Méthodes

Patients de l’étude

Étude rétrospective de cas-témoins Entre février et janvier, un total de receveurs consécutifs de greffe rénale sR- IgG-séronégative de CMV de notre unité de transplantation rénale ont été éligibles pour participer à l’étude. Confirmer un statut sérologique pré-implantable stable CMV IgG, sérologie sérielle Nous avons exclu les patients de l’étude: patients sans prélèvements sanguins prétransplantatoires, avec des titres faibles mais détectables en IgG anti-CMV des mois avant la transplantation non détectables à la transplantation, et qui ont reçu de nombreuses transfusions sanguines au cours des mois précédant la transplantation. Nous avons donc évalué des receveurs de greffe de rein. Nous avons inclus des receveurs de greffe sR contemporains et appariés consécutivement dans un rapport: avec le groupe sR-

Stratégies préventives contre le CMV

Une stratégie préventive a été utilisée, tous les patients sR- recevant une allogreffe séronégative sR- / sD- et tous les patients sR ne recevant pas d’agents diminuant les lymphocytes T, par exemple, la globuline antithymocytaire de lapin [rATG] prophylaxie avec valgancyclovir pendant plusieurs jours était limitée à sR – patients recevant une allogreffe séropositive sR- / sD et / ou rATG thérapie d’induction

Données cliniques et définitions

La définition de l’infection par le CMV était basée sur les critères recommandés par l’American Society of Transplantation pour les essais cliniques . En bref, la virémie CMV était définie par la détection, soit par un dosage quantitatif des acides nucléiques, soit par le test d’antigénémie PPD. la réplication du CMV dans le sang sans symptômes, et la maladie à CMV a été définie comme une preuve de la réplication / antigénémie du CMV avec des symptômes compatibles, y compris le syndrome viral et la maladie invasive du tissu

Études microbiologiques

La surveillance de l’antigénémie du CMV a été déterminée dans des leucocytes polymorphonucléaires obtenus par sédimentation au dextrane et fixés au formaldéhyde, colorés, et lus sous un microscope à fluorescence antigenemia rapide anti-humain CMV ppUL; Argene; reference – La surveillance quantitative de la détection de l’ADN du CMV a été évaluée dans le plasma à l’aide d’un kit CMV en temps réel Abbott La valeur de coupure pour la détection de l’ADN du CMV était de copies / mL évaluée dans le plasma

Essai immuno-enzymatique pour la détection des IgG anti-CMV

Le sérotype du CMV a été déterminé à l’aide d’un dosage immuno-enzymatique CMV IgG commercialisé. Kit BioCheck selon les instructions du fabricant Deux tests sérologiques en série ont été effectués pendant l’année avant la transplantation, suivi d’une autre évaluation juste au moment de la transplantation. pour la séronégativité était & lt; IU / mL

Peptides CMV

En tant que stimulus pour le test ELISPOT IFN-y, nous avons utilisé des pools dérivés d’un peptide peptidique chevauchant des acides aminés couvrant la longueur totale de l’antigène à travers la protéine immédiate IE- et la protéine Jerini Peptide Technologies; Swiss-Prot ID P et P, respectivement de virus de l’herpès humain CMV humain, plus un lysat de CMV Autoimmune Diagnostik Cela nous a permis d’éviter les restrictions de l’antigène leucocytaire humain Nous avons utilisé Human CMV AD lysat viral de souche virale Advanced Biotech; – détecter les cellules B sécrétrices d’IgG spécifiques du CMV

Évaluation de la cellule T effectrice de mémoire / effecteur spécifique au CMV

ELISPOT T-Cell spécifique au CMV

Des tests ELISPOT sur lymphocytes T spécifiques au CMV ont été réalisés comme décrit ailleurs . Brièvement, × cellules mononucléaires du sang périphérique μL ont été stimulées en triple avec un pool de peptides antigène CMV μg / mL pendant des heures, qui évaluaient exclusivement les réponses immunitaires mémoire. des spots utilisant un anticorps IFN-γ anti-humain biotinylé développé par l’addition de substrat de conjugué de phosphatase alcaline AID Les spots résultants ont été comptés semi-automatiquement avec un lecteur ELISPOT AID ELISPOT Reader HR, quatrième génération

Évaluation spécifique de la mémoire B / effecteur de cellules B du CMV

Test de stimulation de cellules B mémoire

Pour induire et différencier les cellules B mémoire en ASC, les cellules mononucléées du sang périphérique ont été cultivées × cellules / mL; à ° C en% de dioxyde de carbone pendant plusieurs jours à Roswell Park Memorial Institute avec supplément de mmol / L de l-glutamine,% de sérum foetal de veau, mg / mL de pénicilline G Britannia Pharmaceuticals, mg / mL de streptomycine Sigma-Aldrich, ng / mL de Interleukine Mabtech, et μg / mL Récepteurs de type Toll / agoniste R Mabtech Comme le montre la figure supplémentaire, une proportion significative de lymphocytes B mémoire proliférait et se différenciait en ASC Après un lavage approfondi, les cellules étaient utilisées dans des dosages IgG ELISPOT

Test ELISPOT B-Cell IgG spécifique au CMV

Une description détaillée de l’essai ELISPOT IgG des cellules B peut être trouvée dans les données supplémentaires En résumé, nous semé x cellules de l’essai de stimulation des cellules B de mémoire dans ul en triple sur un lysat viral purifié CMV Biotech avancée; – enduit -Bien plaque ELISPOT MAIPSWU Multiscreen, Millipore après heures d’incubation à ° C Les taches d’IgG ont été détectés en utilisant un anticorps anti-IgG humaine biotinylé et mis au point par l’addition de substrat de la phosphatase alcaline conjuguée à la streptavidine Mabtech Les spots obtenus ont été comptés semi-automatique avec un lecteur ELISPOT AID ELISPOT Reader HR, septième génération

Analyses statistiques

Toutes les données sont présentées sous forme de moyennes et les groupes SD ont été comparés en utilisant le test for pour les variables catégorielles, l’analyse de la variance ou du test t pour les données normalement distribuées et le test non paramétrique Kruskal-Wallis ou Mann-Whitney pour les variables non distribuées. Les analyses de corrélation bivariées ont été réalisées en utilisant des tests de Pearson ou de Spearman pour des variables non paramétriques. Une analyse des caractéristiques de fonctionnement du récepteur sensibilité / spécificité a été réalisée pour étudier la valeur du test ELISPOT pour prédire l’infection post-transplantation CMV. niveau de signification statistique était P & lt;

RÉSULTATS

Caractéristiques démographiques initiales des patients

Le tableau résume les principales caractéristiques cliniques et démographiques des patients sR- et des patients sR. La plupart des patients ont reçu une allogreffe rénale d’un donneur séropositif pour le CMV IgG. La plupart des patients sR- ont reçu une prophylaxie anti-CMV, tandis que les patients sR ont été suivis La thérapie préventive a été utilisée chez la plupart des patients présentant soit des anticorps monoclonaux anti-CD, soit une déplétion des lymphocytes T rATG Nous avons observé une virémie et une maladie à CMV en% et% des patients sR-, respectivement; les taux correspondants chez les patients sR étaient% et% Toutes les infections à CMV tardives dans le groupe sR- ont été observées dans la combinaison sR- / sD et apparaissaient en médiane quelques jours après le traitement prophylactique; La plupart des patients étaient asymptomatiques ou avaient des syndromes viraux diagnostiqués Les cas de maladie tissulaire invasive étaient localisés dans le tractus gastro-intestinal Deux patients ont présenté une récidive du CMV après traitement par le valganciclovir

Tableau Caractéristiques cliniques et démographiques des receveurs de transplantation rénale par sérumavirus IgG du CMV Caractéristique sR- Patients n = sR Patients n = Sexe, homme / femme, Non / / Âge, moyenne ± écart type, y ± ± Type de transplantation rénale, donneur vivant / décédé , Non% / / Donneur CMV IgG sérotégatif Séronégatif, Non% Séropositif, Non% Prévention, prophylaxie / préemptif, Non% / / Maintenance IS, Non% TAC / CsA / autre / / / / MMF / mTor-i / / Induction IS, Non% Pas d’induction / rATG / basiliximab / / / / DGF, oui / non, Non% / / BPAR, oui / non, Non% / / Fonction allogreffe eGFR, moyenne ± ET, mL / min Mois ± ± Mois ± ± infection à CMV, oui / non, non% Virémie / / Maladie / / Pretransplant anti-CMV Nombre de cellules ELISPOT T, moyenne ± écart type, IFN-γ taches / × PBMC lysat CMV ± – ± – pp Antigène ± – ± – IE- antig en ± – ± – Caractéristique sR- Patients n = sR Patients n = Sexe, homme / femme, Non / / Âge, moyenne ± SD, y ± ± Type de transplantation rénale, donneur vivant / décédé, Non% / / Donneur CMV IgG séronégatif Séronégatif, Non% séropositif, Non% Prévention, prophylaxie / préemptif, Non% / / Maintenance IS, Non% TAC / CsA / autres / / / / MMF / mTor-i / / Induction IS, Non% Non induction / rATG / basiliximab / / / / DGF, oui / non, non% / / BPAR, oui / non, non% / / Fonction allogreffe eGFR, moyenne ± écart type, mL / min Mois ± ± mois ± ± infection à CMV, oui / non, Non% Virémie / / Maladie / / Comptage ELISPOT des cellules T anti-CMV prétransplantation, moyenne ± écart-type, taches IFN-γ / × PBMC lysat CMV ± – ± – pp Antigène ± – ± – antigène IE- ± ± – Abréviations: BPAR, rejet aigu confirmé par biopsie; CMV, cytomégalovirus; CNI, inhibiteurs de la calcineurine; CsA, cyclosporine A; DGF, fonction de greffe retardée; DFGe, taux de filtration glomérulaire estimé; ELISPOT, dosage immuno-enzymatique; IE-, protéine immédiate-précoce; IFN, interféron; Ig, immunoglobuline; IS, immunosuppression; MMF, mycophénolate mofétil; mTor-i, mTor-inhibiteurs; Les PBMC, les cellules mononucléées du sang périphérique; pp, – phosphoprotéine kDa; rATG, globuline anti-thymocyte de lapin; SD, écart-type; sR-, receveur de greffe IgG-séronégatif pour le CMV; sR, receveur d’une greffe séropositive à l’IgG CMV; TAC, tacrolimusView Large

Sensibilisation pré-formée des CMV à cellules T et B chez les receveurs de greffe de rein sR

Premièrement, nous avons évalué la fréquence des cellules T productrices d’IFN-γ spécifiques du CMV contre des antigènes spécifiques du CMV pp et IE- et un lysat de CMV. Comme montré dans le tableau et la figure supplémentaire,% et% des patients sR- montraient différents Fréquences détectables IE- ± et pp ± CMV-IFN-γ / × cellules mononucléaires du sang périphérique stimulées PBMC Fréquences des lymphocytes T Par la suite, nous avons analysé les lymphocytes B de la mémoire sécrétrice d’IgG spécifiques du CMV en utilisant le test ELISPOT à cellules B dans sR- et sR Comme le montre la figure, les patients sR ont montré des fréquences élevées à la fois des lymphocytes T et B spécifiques à CMV-IFN-γ et IgG, respectivement Figure A, et des receveurs de greffe sR- sans réponses lymphocytaires T spécifiques détectables. des cellules B à mémoire de production d’IgG spécifiques au CMV Figure C Notamment, les individus sR- avec des fréquences de cellules T productrices d’IFN-y spécifiques de CMV détectables présentaient également des cellules B de mémoire sécrétant des IgG spécifiques du CMV en circulation.

Figure View largeTéléchargement de diapositives Images représentatives du cytomégalovirus IgG spécifique au CMV IgG ELISPOT immuno-enzymatique à cellules B Résultats du test ELISPOT IgG anti-CMV séropositifs et séropositifs séropositifs au CMV IgG positifs ou négatifs ; Les lymphocytes B mémoire produisant des IgG spécifiques du CMV ont été détectés chez des patients sR A et sR-B avec des résultats ELISPOT positifs pour les lymphocytes T IFN-γ spécifiques du CMV mais pas chez les patients sR- avec des résultats négatifs CFigure View largeTéléchargement des images représentatives du cytomégalovirus CMV- résultats de l’essai ELISPOT sur les immunoglobulines IgG spécifiques des immunoglobulines B liées à l’enzyme ELISPOT à partir des récepteurs sR- et séropositifs sR- IgG séropositifs pour le CMV IgG avec des résultats d’ELISPOT à cellules T IFN γ positifs ou négatifs spécifiques à l’interféron CMV; Des cellules B mémoire produisant des IgG spécifiques du CMV ont été détectées chez des patients sR A et sR-B avec des résultats ELISPOT positifs pour les lymphocytes T IFN-γ spécifiques du CMV, mais pas chez les patients sR- avec des résultats négatifs.

Fréquences de cellules T IFN-γ spécifiques du CMV préformées chez les patients sR et sR-

Ensuite, nous avons comparé la force de cellules T productrices d’IFN-y préformées contre différents antigènes spécifiques de CMV entre des patients sR- et sR Comme le montre la figure, les réponses T-lymphocytes CMV spécifiques préformées moyennes étaient significativement plus faibles parmi sR- que parmi patients sR, bien qu’un certain nombre de patients sR- aient affiché des fréquences élevées de lymphocytes T IFN-γ, similaires à celles observées chez certains receveurs de greffe rénale sR

Figure View largeTéléchargement de diapositivesPréformé cytomégalovirus Interféron spécifique au CMV IFN γ-produisant des réponses de lymphocytes T entre le sR séropositif pour le CMV et les receveurs de greffe rénale sR-séronégative avant la transplantation chez les patients sR versus sR-, les réponses T spécifiques du CMV spécifique au CMV les antigènes donnés sous la forme de spots d’IFN-y par x cellules mononucléées de sang périphérique stimulées [PBMC] étaient ± par rapport à ± P <1; pour le lysat de CMV, ± par rapport à ± P & lt; La ligne rouge représente la valeur de coupure IFN-γ la plus sensible et la plus spécifique permettant de prédire le développement d'une infection à CMV après une transplantation. Voir en grandDownload (en) glissementPréformé cytomégalovirus Interféron spécifique au CMV IFN Réponses des cellules T productrices de y entre les sR séropositifs pour le CMV et les receveurs de greffe rénale sR-séronégative avant la transplantation chez les patients sR contre sR-, les réponses des lymphocytes T spécifiques aux CMV spécifiques aux CMV en IFN-γ sont stimulées les cellules mononucléées du sang périphérique [PBMC] étaient ± par rapport à ± P & lt; pour le lysat de CMV, ± par rapport à ± P & lt; pour la phosphoprotéine -kDa pp, et ± contre ± P = pour la protéine immédiate-précoce IE- La ligne rouge représente la valeur seuil la plus sensible et la plus spécifique de l'IFN-γ prédisant le développement de l'infection par le CMV après la transplantation

Réponses T spécifiques de CMV préformées et infection à CMV chez les patients sR et sR

Les principales variables démographiques et cliniques ont été évaluées en ce qui concerne l’apparition de l’infection à CMV après transplantation rénale Tableau Aucune association statistiquement significative n’a été trouvée entre des variables telles que le type de traitement préventif contre le CMV, le type d’immunosuppression par induction À l’inverse, les patients qui ont présenté une fonction de greffe retardée ont présenté une incidence plus élevée de CMV après transplantation. Nota: ceux avec une cellule T spécifique préformée détectable par le CMV. les réponses contre les antigènes IE et PPV ont montré des taux significativement plus faibles d’infection par le CMV à la fois virémie et maladie que ceux sans aucune preuve de sensibilisation des lymphocytes T spécifiques au CMV avant la transplantation Figure 2: Cellules T productrices d’IFN-γ spécifique du CMV préformé les fréquences à la fois pp et IE-spécifiques étaient significativement plus faibles chez les patients sR qui déve lignée CMV maladie ou virémie que chez ceux qui ne l’ont pas

Tableau Variables cliniques chez les receveurs de transplantation rénale sR avec CMV Virémie ou maladie Variable CMV Virémie CMV Maladie Oui Non Oui Non n = n = n = n = Sexe, homme / femme, Non% / / / / Âge, moyenne ± SD, y ± ± ± ± DGF, oui / non,% / / / a / BPAR, oui / non,% / / / / / / statut sérologique CMV, non% sR- / sD- sR- / sD Thérapie préventive, non% prophylaxie préventive Niveau de dépression de l’AMP, moyenne ± ET, μg / mL Mois ± ± ± ± mois ± ± ± ± mois ± ± ± ± Induction EST RATG, oui / non, non% / / / / Fonction greffon DFGe, moyenne ± SD, mL / min Mois ± a ± ± a ± Mois ± ± ± a ± Mortalité du patient, oui / non,% / / / / Nombre de cellules ELISPOT anti-CMV, moyenne ± écart type, taches IFN-γ / × PBMC lysat CMV ± ± ± ± pp Antigène ± a ± ± a ± IE- antigène ± a ± ± a ± Variable CMV Virémie CMV Maladie Oui Non Oui Non n = n = n = n = Sexe, homme / femme, Non% / / / / Âge, moyenne ± SD , y ± ± ± ± DGF, oui / non,% / / / a / BPAR, oui / non,% / / / / / / statut sérologique CMV, non% sR- / sD- sR- / sD Thérapie préventive, non% Prophylaxie Niveau minimal de MPA préventive, moyenne ± ET, μg / mL Mois ± ± ± ± mois ± ± ± ± mois ± ± ± ± Induction EST RATG, oui / non, non% / / / / Fonction de greffe DFGe, moyenne ± ET, mL / min Mois ± a ± ± a ± Mois ± ± ± a ± Mortalité du patient, oui / non,% / / / / Nombre de cellules ELISPOT anti-CMV, moyenne ± écart type, taches IFN-γ / × PBMC lysat CMV ± ± ± ± pp Antigène ± a ± ± ± IE- un antigène ± a ± ± a ± Abréviations: BPAR, rejet aigu prouvé par biopsie; CMV, cytomégalovirus; DGF, fonction de greffe retardée; DFGe, taux de filtration glomérulaire estimé; ELISPOT, immunospot lié à une enzyme; IE-, protéine immédiate-précoce; IFN, interféron; IS, immunosuppression; MPA, acide micophénolyque; Les PBMC, les cellules mononucléées du sang périphérique; pp, – phosphoprotéine kDa; rATG, globuline anti-thymocyte de lapin; SD, écart-type; allogreffe sD-, séronégative; SD, allogreffe séropositive; sR-, immunoglobuline CMV greffe séronégative G receveurP & lt; Voir grand

Figure Vue largeTélécharger le cytomegalovirusPréformé cytomégalovirus interféron spécifique au CMV IFN γ-produisant des réponses T-cellules étaient significativement plus faibles chez les immunoglobulines CMV IgG-séronégatifs sR-greffe de rein avec CMV maladie et virémie que chez ceux sans CMV et la virémie chez les patients sR- qui infection par le CMV par rapport à ceux qui ne l’ont pas été, les réponses des cellules T productrices d’IFN-γ spécifiques du CMV ± SD aux antigènes du CMV donnés comme spots IFN-γ par × cellules mononucléées du sang périphérique stimulées étaient de ± versus ± P = pour la phosphoprotéine -kDa pp et ± contre ± P = pour la protéine immédiate-précoce IE-Figure Voir grandTéléchargement diapositivePréformé cytomégalovirus interféron spécifique au CMV IFN γ-produisant des réponses de lymphocytes T étaient significativement plus faibles parmi les immunoglobulines CMV IgG-séronégative sR- transplantés rénaux avec la maladie à CMV et la virémie que chez ceux sans maladie à CMV et virémie Chez les patients sR- qui ont développé une infection à CMV v ersus ceux qui ne le faisaient pas, les réponses des lymphocytes T productrices d’IFN-γ spécifiques ± SD CMV aux antigènes CMV donnés comme spots IFN-γ par × cellules mononucléées du sang périphérique stimulées [PBMC] étaient ± versus ± P = pour -kDa phosphoprotéine pp et ± contre ± P = pour les protéines immédiates-précoces IE-

Réponses des lymphocytes T anti-CMV avant la transplantation et prédiction du risque d’infection par le CMV

L’analyse de la courbe caractéristique du récepteur des résultats d’ELISPOT IFN-γ spécifique du CMV pour les antigènes IE et PPV a montré une sensibilité et une spécificité élevées pour la prédiction de la virémie et de la maladie CMV Figure Le seuil ELISPOT IFN-γ le plus sensible et spécifique Les antigènes pp ont été évalués pour établir le seuil optimal pour définir le résultat ELISPOT du CMV comme une variable binaire positive ou négative capable de prédire l’infection post-transplantation CMV à la fois virémie et maladie Comme montré dans le tableau, les spécificités faibles et les valeurs prédictives positives Des valeurs prédictives et des sensibilités négatives systématiquement élevées ont été observées pour les deux tests, en particulier pour les réponses des cellules IE-T. Lorsque ces valeurs seuils ont été appliquées au groupe de transplantation sR, des fréquences similaires de cellules T spécifiques du CMV prétransplantent le développement. d’infection à CMV avec une sensibilité et une spécificité élevées

Tableau Valeurs prédictives des tests ELISPOT pp et IE-IFN-γ pour la prédiction de la virémie ou de la maladie CMV Sensibilité au test ELISPOT,% PPV,% NPV,% CMV virémie pp IE- CMV maladie pp IE- ELISPOT Test Sensitivity,% PPV, % NPV,% CMV virémie pp IE- CMV maladie pp IE- Abréviations: CMV, cytomégalovirus; ELISPOT, dosage immuno-enzymatique; IE-, protéine immédiate-précoce; IFN, interféron; NPV, valeur prédictive négative; pp, – phosphoprotéine kDa; VPP, valeur prédictive positive

Vue de la figure grandDownload slideReceiver caractéristique de fonctionnement ROC courbes pour la sensibilité et la spécificité de la protéine pré-immédiats anti-immédiate-précoce et anti-kDa phosphoprotéine PP fréquences des cellules T pour prédire le risque de cytomégalovirus CMV virémie et la maladie Zone sous la courbe AUC valeurs étaient P =; % intervalle de confiance [CI], – et P =; % CI, – pour pp et IE-, respectivement, pour la prédiction de la virémie CMV et P =; % CI, – et P =; % CI, – pour la prédiction de la maladie à CMVFigure View largeTélécharger slideCaractéristiques de fonctionnement du receveur ROC Courbes pour la sensibilité et la spécificité des protéines pré-immédiats-précoces-précoces IE et anti-kDa phosphoprotéines PP pour prédire le risque de cytomégalovirus CMV virémie et maladie Zone sous la courbe Les valeurs de l’ASC étaient P =; % intervalle de confiance [CI], – et P =; % CI, – pour pp et IE-, respectivement, pour la prédiction de la virémie CMV et P =; % CI, – et P =; % CI, – pour la prédiction de la maladie à CMV

Discussion

Le statut immunitaire du patient est la présence d’anticorps IgG préformés contre le virus. Cependant, il s’agit simplement d’un substitut de l’immunité adaptative humorale complète susceptible de conférer une protection. Nous rapportons ici l’évaluation de la fréquence des IFN-γ et IgG spécifiques du CMV. Les cellules T et B produisant une mémoire permettent une évaluation plus précise des individus immunosensibles sans preuve sérologique d’immunité humorale spécifique au CMV. Nous avons également montré que les receveurs de greffe présentant des fréquences élevées de lymphocytes T mémoires préformés spécifiques du CMV Ils étaient peu susceptibles de développer une infection à CMV après une transplantation rénale comparativement aux patients sans réponse immunitaire cellulaire, ce qui est cohérent avec notre récent rapport sur les receveurs de greffe de rein sR Les listes d’attente de transplantation rénale peuvent contenir des% sR- Il est bien connu que les receveurs sR- / sD présentent un risque considérablement plus élevé d’infection par le CMV. une proportion significative ne développera jamais d’infection clinique, malgré l’absence de traitement préventif , suggérant que les réponses des cellules T effectrices spécifiques du CMV se rétablissent rapidement et efficacement immédiatement après la transplantation, fournissant ainsi une protection et un contrôle suffisants de la réplication du CMV , ou que ces personnes peuvent être sensibilisées avant la transplantation, malgré l’absence de titres d’IgG anti-CMV dans leurs échantillons sériques. Il est important de noter que, bien que les réponses des lymphocytes B soient couramment évaluées par la mesure sérologique des anticorps spécifiques, niveau, peut ne pas fournir une évaluation suffisante du répertoire de mémoire absolue, car il exclut le sous-ensemble de cellules B mémoire En effet, les cellules B mémoires peuvent exister en l’absence de niveaux d’anticorps sériques détectables dans différents contextes biologiques et la différenciation rapide en ASCs avec la production d’anticorps peut avoir une grande pertinence pour une protection humorale r À cette fin, le test ELISPOT à cellules B hautement sensible permet une détection précise des ASCs IgG spécifiques des antigènes au niveau monocellulaire . Nous avons observé que les patients sR présentaient des fréquences élevées concomitantes d’ASCs IgG spécifiques du CMV. et certains patients sR- peuvent également avoir des fréquences détectables d’ASCs IgG spécifiques du CMV. Ceci suggère que ces patients étaient déjà sensibilisés contre le CMV bien qu’ils ne présentent pas d’anticorps circulants. On pense que le compartiment T joue un rôle clé dans la réplication et le contrôle viral. Par conséquent, nous avons cherché à étudier la réponse des lymphocytes T mémoire spécifique du CMV contre les antigènes immunogènes CMV dominants IE- et pp chez les patients sR- Premièrement, nous avons observé que les patients sR- avec IgG-ASC spécifique détectable CMV ont également montré fréquences élevées des lymphocytes T à mémoire de lymphocytes T produisant l’IFN-γ, renforçant le fait que ces individus avaient déjà été en contact avec le CMV malgré l’absence de preuve sérologique d’anticorps IgG. Des réponses robustes des cellules T ont été observées dans les deux groupes, suggérant un certain degré de variabilité de la sensibilisation immunitaire entre les individus qui peut être détecté de manière appropriée en utilisant un outil sensible tel que le test ELISPOT IFN-γ. d’autres investigateurs, nous avons récemment rapporté que la présence de fréquences de lymphocytes T spécifiques CMV chez les patients sR semble fournir une protection contre l’infection par le CMV après transplantation rénale Fait intéressant, dans notre étude actuelle, les patients sR- ne développent pas la virémie CMV ont montré des fréquences de lymphocytes T mémoire significativement plus élevées détectables par IFN-γ, en particulier contre l’antigène IE-CMV, que les patients développant une infection à CMV après traitement prophylactique. De même, le même effet protecteur a été observé chez nos patients sR témoins. et la valeur seuil spécifique de l’ELISPOT à cellules T a été utilisée comme variable binaire positive ou négative à d Ceci montre l’utilité de l’essai pour identifier les receveurs de greffe de rein immunisés sans titres détectables d’IgG du CMV sérique. Une limitation de notre étude est relativement limitée. la taille de l’échantillon est faible, ce qui empêche l’analyse multivariée de savoir si les sensibilisations T et B préformées sont des variables protectrices indépendantes contre l’infection à CMV après la transplantation. Néanmoins, nos données devraient être utilisées pour guider les futures études prospectives randomisées de ces tests immunitaires dans le contexte rénal. En résumé, nos observations peuvent avoir des implications cliniques pertinentes, car% -% des receveurs de greffe sR-adulte peuvent avoir des clones de mémoire B et T spécifiques de la mémoire CMV pré-formés robustes préétablis, conférant finalement une protection immunitaire suffisante pour éviter CMV inf ection après transplantation rénale

Remarques

Remerciements Nous remercions nos techniciens de laboratoire, qui ont fourni une assistance experte et soigneusement géré tous les échantillons biologiques, et Yolanda Perez, le coordinateur de la biobanque à notre centre. Soutien financier Ce travail a été financé en partie par des subventions publiques nationales. de la subvention du BIODRIM Consortium de minimisation de l’immunosuppression conduite par un biomarqueur, CEE Bio-Drim, et de l’espagnol Red de Investigación Renal REDinREN; subvention RD / Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: Aucun conflit signalé Tous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits d’intérêts potentiels Conflits que les éditeurs considèrent pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués