Détection du gène du transporteur de résistance à la chloroquine de Plasmodium falciparum dans les cas de paludisme à Plasmodium falciparum importés

caractéristique essentielle pour nos collègues cliniciens: la capacité à assurer, dans un délai d’exécution de & lt; heures, jours par semaine, qu’un voyageur fébrile donné n’a pas le paludisme En plus de son utilité dans le diagnostic de l’infection palustre, la PCR semble être un must pour les enquêtes épidémiologiques axées sur Plasmodium falciparum avec résistance aux aminoquinoléines. Mutations ponctuelles dans les gènes Pfcrt de résistance à la chloroquine P falciparum et Pfmdr multirésistante au P falciparum Effectuées dans des cohortes de voyageurs ou d’immigrants retournés, ces études de surveillance moléculaire ont montré qu’une forte proportion de patients présentant un paludisme à P. falciparum En d’autres termes, les infections paludéennes de ces sujets auraient probablement été guéries par la chloroquine CQ, qui reste l’un des médicaments les moins chers et les plus sûrs jamais utilisés pour le traitement du paludisme. Donc, nous sommes entièrement d’accord avec Farcas et al , qui ont affirmé que l’évaluation moléculaire de la sensibilité CQ, fondée sur la détection de la mutation T par Comme le suggèrent les auteurs d’un article de synthèse , la sensibilité d’un test moléculaire pour la détection de la résistance au CQ serait d’une importance cruciale. En d’autres termes, un tel test devrait montrer un bon sensibilité, mais elle devrait également être capable de détecter une fraction mutante minoritaire dans une population sensible de type sauvage. Le test réalisé par Vessiére et al au Département de Parasitologie de l’Hôpital Universitaire de Rangueil, Toulouse, France a montré un% de sensibilité pour la Mutation KT, qui paraissait insuffisante pour éviter l’apparition de résistances RI / RII en cas d’utilisation thérapeutique de CQ Nous avons donc développé un test plus sophistiqué, dans lequel des sondes d’acides nucléiques bloquées bloquaient l’amplification de génotypes sauvages, de sorte que la détection En conséquence, la sensibilité a atteint un pic à%, se traduisant par un parasite de P. falciparum muté de formes asexuées de P falciparum de type sauvage. Etant donné la conception des amorces et des sondes, ce test PCR pouvait détecter tous les haplotypes KT pfcrt, et il fournissait différents points de température de fusion Tm, pour les haplotypes mutés et sauvages. Ainsi, le résultat n’était pas affecté par l’origine géographique l’isolat parasite Nous avons donc été surpris que Farcas et al n’évaluent pas la sensibilité de leur méthode en utilisant, par exemple, des mélanges artificiels de souches de P sucre inverti. falciparum mutées et sauvages. De plus, ces auteurs n’ont trouvé aucune infection infectieuse mixte En comparaison, Vessière et al rapportent que les cas de paludisme importés étaient des infections mixtes, la plupart d’origine africaine. Par PCR nucléique verrouillée, des infections mixtes ont été détectées dans le même lot de patients. Berry, communication personnelle Un problème de spécificité pourrait être exclu, car aucun de ces patients ou patients n’a eu de résultats positifs pour le paludisme par des techniques PCR classiques et en temps réel. Espèces autres que P falciparum Farcas et al ne donnant aucune description des amorces utilisées, toute comparaison analytique avec nos études était impossible. Le niveau de sensibilité de leur test reste, par conséquent, discutable, ce qui est un problème en suspens pour un Un kit qui pourrait avoir un destin commercial Farcas et al ont critiqué le test utilisé par Vessière et al en raison de «l’absence de comparaison directe avec un étalon de référence accepté» [, p] Comme nous le savons, il existe aucun «étalon de référence» disponible pour la souche de P. falciparum mutée par KT; de plus, nous n’avons trouvé aucune utilité pour une telle norme dans l’article de Farcas et ses collègues concernant « l’absence de contrôles négatifs » [, p], nous renvoyons à la figure de l’article de Vessière et collègues, où un adjuvant contenant% Enfin, nous sommes entièrement d’accord avec Farcas et al sur la nécessité d’exigences de qualité dans les laboratoires effectuant un diagnostic du paludisme. En France et dans la plupart des pays de l’Union européenne, tout laboratoire privé ou public doit mettre en œuvre Bonnes Pratiques de Laboratoire, une obligation légale minimale Cependant, des contraintes de qualité beaucoup plus rigoureuses devraient être attendues des laboratoires spécialisés dans les techniques moléculaires de diagnostic de routine des maladies infectieuses. Notre département est en cours d’accréditation par le Comité Français d’Accréditation le Forum International d’Accréditation En cours d’examen sont les procédures de diagnostic moléculaire pour le paludisme, y compris la détection de la mutation KT, pour la leishmaniose cutanée et viscérale, pour la pneumocystose et aussi pour la toxoplasmose in utero Dans les prochains mois, les pratiques de l’Unité de Diagnostic Moléculaire de l’Hôpital Universitaire de Rangueil, Toulouse, France seront conformes à l’Organisation Internationale de Normalisation: et: les normes

Remerciements

Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: pas de conflits