Amélioration de l’activité d’assimilation d’ions Fe chez des souches d’Helicobacter pylori isolées chez des patients atteints d’anémie ferriprive

Des études récentes ont suggéré un lien entre l’anémie ferriprive et l’infection par Helicobacter pylori. Dans la présente étude, des souches de H pylori dérivées de patients atteints d’anémie ferriprive présentaient une augmentation de l’absorption d’ions Fe et une croissance rapide dépendante des ions Fe par rapport aux patients. anémie non carencée en fer H pylori avec une capacité accrue d’absorption d’ions Fe peut être un facteur causal de l’anémie ferriprive

Dans la présente étude, nous avons comparé la capacité d’absorption d’ions Fe des souches de H pylori récupérées chez des patients atteints d’IDA et de patients atteints de maladies gastroduodénales sans IDA non IDAMéthodes. Les critères de l’IDA de puberté étaient les suivants: ; 12 g / dL pour les mâles ou 115 g / dL pour les femelles; volume corpusculaire moyen, & lt; 78 fL; concentration moyenne d’hémoglobine corpusculaire, & lt; 26 pg; Niveau de Fe, & lt; 50 μ g / dL; niveau de ferritine sérique, & lt; 10 μ g / mL; et degré de saturation de la transferrine, & lt; Le statut d’infection à 16% de H pylori était basé sur la présence d’IgG anti-H pylori sérique, telle que mesurée par ELISA HM-CAP; Produits entériques et test de l’antigène des selles H pylori Premier Platinum HpSA; Diagnostic du méridien Nous avons isolé H pylori à partir de biopsies gastriques d’enfants infectés par H pylori. Un consentement éclairé a été obtenu des parents de chaque patient L’isolement et l’identification de H pylori ont été décrits ailleurs [7] les niveaux d’hémoglobine étaient & lt; 10 g / dL, en tenant compte des différences entre mâles et femelles Nous avons également sélectionné 10 isolats de H pylori dérivés de patients sans symptômes d’anémie, c’est-à-dire non-IDA Le rapport hommes-femmes et la distribution par âge du groupe de patients sans IDA étaient comparables à ceux du groupe de patients avec IDA Les âges SE des groupes avec IDA et avec non-IDA étaient 134 ° 08 et 139 ° 34 ans, respectivement P = non significatif Les deux groupes comprenaient 6 hommes et 4 femmes. Les groupes IDA et non-IDA étaient respectivement 4016 ° 606 et 4811 ° 356 × 104 / μL, P & lt; 05 Les taux d’hémoglobine étaient de 717 ° 162 et 1377 ° 153 g / dL, respectivement P & lt; Les niveaux 05 Fe étaient 128 ° 46 et 1017 ° 238 μ g / dL, respectivement P & lt; 01 Les niveaux de Pepsinogen I étaient de 677 ° 184 et 861 ° 722 ng / mL, respectivement P = non significatif Les niveaux de Pepsinogen II étaient de 177 ° 75 et 230 ° 176 ng / mL, respectivement P = non significatif Les pepsinogènes ont été déterminés comme marqueur gastrique inflammation [8] Les significations statistiques ont été évaluées par le test t non apparié. Les isolats de pylori ont été pré-cultivés sur une plaque de gélose sélective Helicobacter Nissui Pharmaceuticals Les cellules ont été recueillies sur gélose et inoculées dans un bouillon de perfusion cerveau-coeur additionné de 5% de sérum bovin fœtal BHI On a réalisé une culture cellulaire restreinte en Fe avec du BHI-FCS additionné de 20 μ mol / L de déféroxamine mesylate Sigma-Aldrich On a réalisé une culture cellulaire de Fe suffisante avec BHI-FCS Le nombre de cellules a été déterminé par la turbidité mesurée par l’absorbance à 600 nm la capacité d’absorption a été déterminée essentiellement selon la méthode de Velayudhan et al [9] En bref, les cellules cultivées dans BHI-FCS à la phase exponentielle tardive ont été recueillies et lavées deux fois dans Dulbecco’s PBS Les cellules ont été remises en suspension dans du PBS à une concentration de 20-30 mg de protéine cellulaire totale par millilitre et ensuite maintenues dans des conditions microaérobies à 37 ° C pendant 1 h. La suspension cellulaire 100 ul a été ajoutée à 2 ml de Chelex-100 Sigma BHI-FCS traité par Aldrich, qui contenait 04% de glucose et 100 μ mol / L d’acide nitorilotriacétique 55FeCl3 Perkin-Elmer a été utilisé pour le dosage des ions Fe. Pour examiner l’absorption de Fe2, 55FeCl3 a été dilué 10 fois dans 1 mol / L de l’acide ascorbique Pour examiner l’absorption de Fe3, 55FeCl3 a été dilué 10 fois dans 1 mol / L de citrate de sodium avant le dosage. Chaque solution de 55FeCl3 20 kBq par tube a ensuite été ajoutée à la suspension cellulaire. sur 03 ml d’huile de silicone Sigma-Aldrich et centrifugé à 12 000 g pendant 1 min, pour arrêter l’absorption en granulant les cellules à travers l’huile. La couche aqueuse est éliminée et la surface de l’huile est lavée deux fois avec du PBS. et le culot cellulaire a été mis en suspension dans 100 μL de 1% v / On a ensuite placé la suspension cellulaire solubilisée dans le scintillant à comptage aqueux II GE Healthcare Bioscience et on a compté la radioactivité dans la suspension en utilisant le canal 3H d’un compteur à scintillation liquide et on l’a utilisée comme activité d’absorption d’ions Fe. Les expériences ont été réalisées en quadruplicatsRésultats Nous avons examiné 10 souches H pylori récupérées chez des patients avec IDA et 10 souches récupérées chez des patients sans IDA. Nous avons d’abord comparé le taux de croissance des 2 groupes de souches dans des conditions Fe-restricted ou Fe-suffisant 1A et 1B Dans des conditions Fe-suffisantes, les souches récupérées chez les patients avec IDA ont montré des taux de croissance significativement plus élevés que ceux des patients sans IDA. Dans des conditions restreintes en Fe, le taux de croissance des souches avec des tests effectués dans des conditions Fe-suffisantes La plupart des souches récupérées chez des patients non-IDA ont montré une taux de croissance dans des conditions restreintes en Fe et en conditions suffisantes de Fe Dans des conditions restreintes de Fe, les taux de croissance cellulaire n’étaient pas significativement différents entre les souches récupérées chez les patients avec IDA et chez les patients sans IDA

Figure 1View grandDownload slideCell croissance dans des conditions d’ions Fe restreintes et insuffisantes et absorption d’ions Fe dans des souches d’Helicobacter pylori récupérées chez des patients présentant une anémie ferriprive ou sans anémie ferriprive A, courbes de croissance cellulaire de souches représentatives, culture en ions Fe suffisante conditions; Conditions de culture restreintes aux ions B B, Comparaison des taux de croissance cellulaire Les données représentent l’absorbance à 600 nm à 48 h C, Fe2left ou Fe3right capture d’ions de cellules H pylori Les données représentent la moyenne ° SE de 4 expériences indépendantes Les significations statistiques ont été évaluées par Le test t non appariéFigure 1View largeTélécharger slideCell croissance dans des conditions de restriction et d’ion Fe limitées et absorption d’ions Fe dans des souches d’Helicobacter pylori récupérées chez des patients présentant une anémie ferriprive ou sans anémie ferriprive A, courbes de croissance cellulaire de souches représentatives, ions Fe conditions de culture suffisantes; Conditions de culture restreintes aux ions B B, Comparaison des taux de croissance cellulaire Les données représentent l’absorbance à 600 nm à 48 h C, Fe2left ou Fe3right capture d’ions de cellules H pylori Les données représentent la moyenne ° SE de 4 expériences indépendantes Les significations statistiques ont été évaluées par Le test t non appariéNous avons examiné l’absorption de Fe3 ou Fe2 par les souches Figure 1C L’absorption de Fe2 et Fe3 était plus grande pour les souches récupérées chez les patients avec IDA que chez les patients non IDA. Différences d’absorption des ions Fe entre les souches IDA Bien que les preuves épidémiologiques et cliniques de la relation entre l’infection par H pylori et l’incidence de l’IDA se soient accumulées, l’étiologie de l’IDA associée à H pylori n’est pas claire. Les résultats de l’étude actuelle ont montré que les souches de H pylori récupérées chez les patients avec IDA présentaient un taux de croissance cellulaire rapide d’une manière dépendante des ions Fe. Sur la base de ces résultats, nous proposons que l’un des facteurs de risque pour l’IDA est l’infection par certaines souches de H pylori Fe est un facteur essentiel. Pour H pylori, comme pour toutes les bactéries, les souches de H pylori qui ont une efficacité accrue d’absorption d’ions Fe consomment des ions Fe dans l’estomac et se développent rapidement en présence d’ions Fe. En outre, les cellules H pylori dans lesquelles s’accumulent de grandes quantités d’ions Fe excrété dans les selles La consommation et l’excrétion accrues de Fe dues à certaines souches de H pylori peuvent contribuer à la carence en Fe chez l’hôte et au développement de l’IDA Ainsi, outre les facteurs environnementaux et hôtes, les souches particulières de H pylori peuvent être impliquées dans développement de IDAWe n’ont pas identifié les molécules qui contribuent à l’absorption accrue d’ions Fe de H pylori associée à l’IDA Plusieurs candidats, cependant, peuvent être explorés H pylori dans l’estomac humain ac Quires Fe par la lactoferrine humaine [10] Dhaenens et al [11] ont identifié une protéine liant la lactoferrine de H pylori qui réside dans la membrane externe Récemment, l’hepcidine, qui est un peptide antimicrobien récupéré du foie, a été identifié et caractérisé Le lien entre l’hepcidine L’induction, l’inflammation induite par le pylore H et l’anémie chez l’homme et chez l’animal suggèrent son rôle clé en tant que médiateur de l’anémie [12]. Cependant, nous n’avons pas déterminé les taux d’hepcidine dans le sérum FeoB. Mécanisme d’acquisition d’ions Fe2 dans H pylori [9] Jeon et al [13] ont rapporté plusieurs polymorphismes de feoB qui semblent être associés à l’IDA; Cependant, la relation n’a pas encore été complètement élucidée à cause du petit nombre de souches étudiées. Nous avons déterminé la séquence d’ADN de feoB dans les souches utilisées dans la présente étude et n’avons pas observé de relation significative entre les polymorphismes de FeoB et al [14] ont réalisé une analyse protéomique comparative des souches H pylori récupérées chez des patients avec IDA et avec non-IDA. Ils ont montré que les souches associées à IDA et non-IDA pouvaient être distinguées par leurs profils d’expression protéique et qu’un certain nombre de protéines avaient des niveaux d’expression plus élevés dans les souches IDA Cependant, les identités des protéines qui contribuent à l’IDA sont inconnues. Des études supplémentaires sont nécessaires pour élucider le mécanisme moléculaire de l’absorption accrue d’ions Fe dans les souches H pylori récupérées chez les patients IDA.

Remerciements

Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: pas de conflits